《第25小时》讲述了Monty（爱德华·诺顿 Edward Norton 饰）入狱前最后一天的经历。白天，他牵着狗在纽约街头散步，随后回到曾经就读的学校，探望如今在那里教授英语的老友Jacob（菲利普·塞默·霍夫曼 Philip Seymour Hoffman 饰）。课堂上，女学生Mary（安娜·帕奎因 Anna Paquin 饰）格外活跃；与此同时，Monty和Jacob的另一位好友Frank（巴里·佩珀 Barry Pepper 饰）正忙于公司的工作。
某天下午，Monty回到家时，发现女友Naturalle（罗莎里奥·道森 Rosario Dawson 饰）已经在门口等了很久。两人在浴缸中调情之际，警察突然敲响了房门，并搜出了藏在沙发里的毒品。Monty因此被起诉，最终被判处七年监禁。距离他进入监狱只剩几个小时，他开始怀疑是否是Naturalle出卖了自己。
Monty随后去找父亲，两人进行了长谈。之后，他们一行人来到酒吧，却意外遇见了Jacob的女学生Mary。24小时即将过去，新的一个小时开始时，Monty也将正式开启自己的监狱生涯。
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