《博物馆奇妙夜2》中，曾在纽约自然历史博物馆担任警卫并表现出色的拉瑞（本·斯蒂勒 Ben Stiller 饰），如今已成为一家小型家电公司的CEO，还登上电视接受著名脱口秀主持人的采访，事业、亲情与爱情似乎都十分顺遂。然而，当他重返博物馆时，却得知馆长正在更新展览，并准备将那些过时的展品转移到华盛顿的史密森博物馆继续展出。拉瑞对此既失落又气愤，认为自己有责任让博物馆重新焕发生机，于是决定留下来再当一晚警卫，召集罗斯福（罗宾·威廉斯 Robin Williams 饰）、林肯、拿破仑、伊凡雷帝和阿尔·卡邦等老朋友共同守护这里。没想到，邪恶的古埃及法老卡门拉再次出现，成为拉瑞面临的强大对手，一场发生在夜幕下的博物馆惊魂对决就此展开。
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